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凝膠電泳法檢測內**

更新時間:2021-04-29點擊次數:1201

那么下面上海金鵬分析儀器有限公司為大家簡單介紹一下關于凝膠電泳法檢測內**:
凝膠電泳法
當將含有內**的溶液與裂解物混合后進行孵育時,方法A和B取決于牢固凝膠的形成。方法A作為極限測試進行,其中受檢制劑的兩種重復溶液中所含的內**的濃度均應低于各論中規定的內**極限濃度。方法B半定量測定所檢查制劑中的內**濃度


裂解液的敏感性
在測試中使用每批裂解物至少一個小瓶之前,請確認每批新裂解物的標記靈敏度。準備一系列的CSE稀釋液,使濃度分別為2λ,λ,0.5λ和0.25λ,其中λ是裂解液在EU中每毫升的標記靈敏度。對這四個標準濃度一式兩份,按照方法給出的方法進行測試,并包括由水BET組成的陰性對照。至少每個系列中的**終稀釋液**給出陰性結果。
計算在發現陽性結果的每個稀釋系列中**低內**濃度的對數平均值。幾何平均終點濃度是裂解液的測量靈敏度,以ED / ml為單位,可使用以下表達式計算:
 
幾何平均終點濃度=反對數(∑e / f)
其中,∑e =對數之和使用的一系列稀釋液的終點濃度
f =復制試管的數量。
該平均值給出了估計的裂解物敏感性,**在0.5λ和2λ之間。
測試干擾因素
應牢記某些因素干擾內**測試的可能性。為了驗證測試結果,**證明測試制劑不會抑制或增強反應或以其他方式干擾測試。的驗證如果裂解物的供應商或制造或樣品的制劑的方法改變**被重復。
用水BET稀釋測試制劑是克服抑制作用的**簡單方法。
 
允許的稀釋水平或**大有效稀釋度(MVD)取決于產品的濃度,產品的內**極限和裂解物的敏感性。它由以下表達式計算:
 
MVD =內**極限x測試溶液的濃度
                                                        λ
準備測試溶液。如表中所示準備溶液A到D的重復樣品。
 
溶液A =稀釋度等于或低于MVD的產品溶液(測試溶液)。
溶液B =加標有指dingCSE濃度的測試溶液(正產品控制; PPC)。
溶液C =在水BET中具有指示的CSE濃度的標準溶液。
溶液D =水BET(陰性對照; NC)。
方法 
在試管,小瓶或微量滴定板孔等容器中執行以下步驟。在每個選定的容器中,添加適量的陰性對照(NC),水BET中的標準CSE溶液,測試溶液和陽性產品對照(PPC)。除非使用單個測試瓶,否則應間隔一定時間以允許讀取每個結果,向每個容器中添加等體積的適當構成的裂解液。輕輕地混合樣品裂解物混合物,然后放置在諸如水浴或加熱塊的培養裝置中,準確記錄放置容器的時間。將每個容器在不受干擾的37°±10孵育60±2分鐘。取下容器并仔細檢查內容物。
將此結果記錄為正(+)。陰性結果的特征是不存在這種凝膠或形成不保持其完整性的粘性凝膠。將這樣的結果記錄為負(-)。小心處理容器,避免使它們遭受不必要的振動,因為可能導致錯誤的負面觀察。
 
通過使用在裂解物敏感性下描述的公式,計算C帶系列溶液的幾何平均終點濃度。
計算和結果解釋
如果
a)系列A和D的解決方案給出否定的結果,則干擾因素的檢驗是有效的;
b)用C系列溶液獲得的結果證實了裂解物的標記靈敏度;
c)B系列溶液終點濃度的幾何平均值不大于21或不小于0.51。
 
如果獲得的結果超出規定的范圍,則所檢測的測試制劑將充當抑制劑或活化劑。可以通過進一步稀釋(不超過MVD),過濾,中和,滅活或通過去除干擾物質來消除干擾因素。使用更敏感的裂解液可以對所檢查的制劑進行更大的稀釋。如果干擾因素通過標稱分離極限的分子量對應于10,000到20,000的過濾器,例如三乙酸纖維素的不對稱膜過濾器,則可以使用超濾。 
應該檢查這種過濾器是否存在任何導致假陽性結果的因素。用水BET或pH 7.4 BET的三氯化物緩沖液沖洗保留在過濾器上的含有內**的物質。內**在水BET或緩沖液中回收。確定每種待測制劑的測試體積和**終體積中的內**濃度。
通過使用添加了CSE并已提交給所選方法的待測制劑,通過重復進行干擾因子測試,確定所選方法可有效消除干擾,而不會去除內**。
以上就是上海金鵬分析儀器有限公司為大家整理總結關于凝膠電泳法檢測內**。
 
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