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如何分析電泳

更新時(shí)間:2021-05-18點(diǎn)擊次數(shù):1650

那么下面上海金鵬分析儀器有限公司為大家簡單介紹一下關(guān)于如何分析電泳:
 
在凝膠電泳儀中,DNA或蛋白質(zhì)樣品的分離(通常基于大小)是通過施加電場使它們遷移通過凝膠來分離的。凝膠電泳在生物醫(yī)學(xué)研究實(shí)驗(yàn)室中是常規(guī)操作,可用于回答各種不同的問題,因此,實(shí)際上并沒有一種通用的方法來分析結(jié)果。
例如,諸如蛋白質(zhì)印跡,RNA印跡和DNA印跡的不同技術(shù)都涉及凝膠電泳。
如果您要進(jìn)行DNA樣品的瓊脂糖凝膠電泳(常見的一種方法),通常需要至少做兩件事:1)區(qū)分未切割的質(zhì)粒與插入片段,帶切口的質(zhì)粒和切割的質(zhì)粒,以及2)估計(jì)使用標(biāo)準(zhǔn)曲線Excel或計(jì)算器計(jì)算各種DNA片段的大小。
運(yùn)作方式如下。
檢查您的實(shí)驗(yàn)室筆記本以確定哪些樣品已裝入哪些通道。當(dāng)裝載凝膠孔時(shí),您應(yīng)該注意每個(gè)泳道/樣品的身份。
確定哪個(gè)泳道包含DNA標(biāo)準(zhǔn)的“階梯”。這些是已知長度的片段。它們的遷移距離可用于通過標(biāo)準(zhǔn)曲線Excel或其他計(jì)算器確定樣品片段的大小。
用尺子測量從孔到跟蹤染料的圖像距離,該染料比任何DNA條帶都行進(jìn)的距離遠(yuǎn)(換句話說,它將位于凝膠的底部)。記錄此數(shù)字-您使用的單位并不重要。
測量照片上從孔到“階梯”中每個(gè)帶的距離,然后用該距離除以跟蹤染料帶所經(jīng)過的距離。此計(jì)算為您提供每個(gè)頻段的相對遷移率。
示例:假設(shè)跟蹤染料帶移動了6英寸,而我們有三個(gè)帶移動了5、4.5和3.5英寸。
他們的相對流動性是什么?答:我們將5、4.5和3.5除以6得到的相對遷移率分別為0.833、0.75和0.5833。
將相對遷移率輸入到電子表格程序(Excel或您使用的任何其他類似程序)中,并將階梯中每個(gè)片段的大小(以千堿基為單位)一起輸入。
制造商會為您提供他們提供的梯子中每個(gè)碎片的大小,因此您應(yīng)該已經(jīng)有了此信息。
x上繪制具有相對移動性的數(shù)據(jù),在y上繪制以千為單位的大小的數(shù)據(jù)。
在電子表格程序上使用趨勢線函數(shù)將方程擬合到數(shù)據(jù)中。該方程式應(yīng)為冪方程式(例如x ^ -2),并且應(yīng)相對較好地?cái)M合數(shù)據(jù)(R系數(shù)至少為0.9)。這將創(chuàng)建一條曲線和一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線Excel。
查看與您的樣本相對應(yīng)的譜帶。
請記住,較小的DNA片段比較大的DNA片段穿過凝膠的距離更遠(yuǎn),因此靠近跟蹤染料的片段將小。但是請注意,如果未切割質(zhì)粒(環(huán)狀)DNA,它將像電話線一樣“超螺旋”或扭曲,這實(shí)際上會使它比相同大小的線性DNA傳播得更遠(yuǎn)。
同樣,未*切割的“切口”質(zhì)粒將比相同大小的線性DNA傳播更短的距離。因此,您無法從凝膠中估計(jì)未切割質(zhì)粒的大小。
將每個(gè)泳道中的條帶與您在該泳道中加載的樣品的標(biāo)識相匹配,并確定您所看到的是否是您所期望的。這將取決于實(shí)驗(yàn)的性質(zhì)。
但是,一般來說,如果您用兩種限制性酶消化插入質(zhì)粒,則可以預(yù)期該插入物中將沒有質(zhì)粒。
由于它比質(zhì)粒小得多,您可能會在該泳道中看到兩條帶,一條靠近頂部,而另一條靠近底部。僅用一種限制酶切割的質(zhì)粒應(yīng)僅形成一條條帶,該條帶比用兩種限制酶切割的質(zhì)粒行進(jìn)的距離要遠(yuǎn)一些,但不能遠(yuǎn)至插入片段。
測量從孔到切出的質(zhì)粒的距離,并用尺子插入條帶。將這些數(shù)字除以跟蹤染料的行進(jìn)距離,即可得出插入片段和切割質(zhì)粒的相對遷移率。
將插入片段和剪切質(zhì)粒的相對遷移率插入電子表格程序?yàn)槟?jì)算的方程式中。這種計(jì)算應(yīng)給您估計(jì)這些質(zhì)粒的大小。
 
以上就是上海金鵬分析儀器有限公司為大家整理總結(jié)關(guān)于如何分析電泳。
 
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