色网址在线-色网址在线观看-色网综合-色翁荡息又大又硬又粗视频-色翁荡息又大又硬又粗又视频软件-色翁荡息又大又硬又粗又视频图片

服務咨詢熱線:

021-66030766

TECHNICAL ARTICLES

技術文章

當前位置:首頁技術文章聚合酶鏈式反應(PCR)技術概述

聚合酶鏈式反應(PCR)技術概述

更新時間:2015-07-20點擊次數:1741

聚合酶鏈式反應(Polymerase Chain ReactionPCR)技術是基因擴增技術的一次重大革新,是分子生物學發展史中的一個重要里程碑。使用PCR擴增技術,可以將極微量的靶DNA片段特異地擴增上百萬倍,大大提高了對DNA分子的分析和檢測能力。PCR技術具有敏感度高、特異性強、快速簡便等優點,在醫學、遺傳學、法醫學、微生物學、食品檢驗、衛生檢驗等眾多領域中具有巨大的應用價值和廣闊的發展前景。


耐熱DNA聚合酶的應用是PCR技術的核心。根據是否具有3’→5’端外切酶活性,耐熱DNA聚合酶通常分為無校讀活性和有校讀活性兩類。無校讀活性的DNA聚合酶(以Taq 酶為代表)具有較高的擴增效率,但由于缺乏校讀活性,容易發生堿基錯配,故產物中點突變較多。Taq DNA聚合酶還具有末端轉移酶活性,可在PCR產物的3’末端非特異地添加堿基,因單個A突出堿基的比例zui高,故PCR產物可直接與含有3’末端突出T堿基的載體連接(即TA克隆),方便PCR產物的克隆、擴增和測序。然而,TaqDNA聚合酶在PCR反應*步升溫過程中即可催化錯配引物延伸或引物二聚體形成,因而導致非特異性擴增,影響目的片段的合成量。針對這一現象設計的熱啟動Taq DNA聚合酶,在低溫時其聚合酶活性被抑制,通過高溫變性,聚合酶的活性恢復,催化特異性結合的引物擴增,因而提高了目的片段的特異性和產量。另一類有校讀活性的DNA聚合酶(以Pfu為代表)可選擇性地去除錯誤摻入的dNTP,維持DNA鏈的正確延伸;然而其擴增效率通常低于Taq DNA聚合酶,特別是對于長片段DNA鏈的延伸能力較差。基于上述兩類酶的特點,可將適量的Taq DNA聚合酶與任意一種有校讀活性的DNA聚合酶混合,在適當的反應緩沖液體系中,可獲得保真性與擴增性能介于上述兩類酶之間的混合酶,用于長片段以及復雜模板的高保真擴增。
 

PCR實驗受諸多因素的影響。的商業化耐熱DNA聚合酶及其配套緩沖液通常可以滿足絕大多數DNA片段擴增的需要。首先應根據模板的性質(基因組、cDNA、質粒等)和目的片段的大小、GC含量、有無二級結構等,選擇合適的DNA聚合酶(參見GenStar? PCR產品選擇指南)。對于難于擴增的片段,應針對不同的模板、引物,優化反應條件,以獲得*的擴增效率
 

A. 模板用量:以50 μl反應體系為例
人基因組DNA0.1~1.0 μg
大腸桿菌基因組DNA10~100 ng
? λ DNA
0.5~5 ng
質粒DNA0.1~10 ng
 

B. 引物設計原則:
引物長度要滿足特異性需要,一般可在18~25個堿基之間;擴增長片段時在24~30個堿基之間;
G+C%含量應盡量控制在40~60%,兩條引物的(G+C%含量應盡量接近;
盡量避免相同堿基連續出現三次以上,3’端應避免使用AT
避免引物內部自身配對形成二級結構;
正反向引物之間應避免配對堿基,尤其是3’端的三個堿基,否則易生成引物二聚體(Primer dimer);
兩條引物的Tm值應盡量接近,相差不超過5oC
引物Tm值的計算方法:
20 nt以下:Tm = 2xA + T+ 4xG+C
20 nt以上:Tm = 81.5+0.41xG+C%-600/ntnt:引物的堿基數)
 

C. 引物用量:
? 0.1~1.0 μM,通常可以0.2 μM起始,根據體系不同調整用量;
使用簡并引物、隨機引物時,需增加引物總量以彌補產量損失;但隨著引物量加大,特異性將降低;
模板較大較多,或結構較復雜(如人基因組DNA)時,需減少引物用量以提高特異性;
模板較小較少(如質粒模板)時,增加引物用量可提高產量。

尊敬的客戶:
    感謝您關注我們的產品,本公司除了有此產品介紹以外,還有三用紫外分析,核酸蛋白檢測儀,凝膠成像分析系統
光化學反應儀恒流泵,自動部分收集器等等的介紹,您如果對我們的產品有興趣,咨詢。謝謝!


上海嘉鵬科技有限公司 www.shjpkj。。com / www.jp1718。。com
:   36162366 
400免費:4000-123-925  
 
,,,,2880150297

地址:上海市真陳路1398弄15號  :200444 

上一個:蠕動泵軟管、泵管破損的幾種情況分析-

返回列表

下一個:旋轉蒸發器使用簡介

人妻少妇被猛烈进入中文字幕 | 免费a一级毛片在线播放 | 国产成人无码一区二区在线观看 | 国产丰满老熟妇乱xxx1区 | 久久精品一区二区免费播放 | 亚洲av无码专区电影在线观看 | 欧美人与性动交α欧美精品 | 国产熟妇人妻精品一区二区动漫 | 日本sm/羞辱/调教/捆绑视频 | 免费午夜爽爽爽www视频十八禁 | 亚洲国产无线乱码在线观看 | 久久久久久九九99精品 | 国产成人免费ā片在线观看 | 日本一卡2卡3卡4卡无卡免费网站 | 区二区欧美性插b在线视频网站 | 成人免费视频在线观看 | 久久国产高清视频 | 欧美黑人又粗又大又爽免费 | 亚洲av无码一区二区乱子伦as | 免费观看毛片网站 | 91国内精品| 粉色午夜视频 | 人妻少妇精品无码专区动漫 | 调教小奴高潮惩罚play露出 | 免费又黄又爽又色的视频 | 国产真实younv在线 | 久久99精品国产麻豆蜜芽 | 久爱www人成免费网站 | 性色av无码不卡中文字幕 | 交视频在线观看国产网站 | 国产a久久精品一区二区三区 | 亚洲av久久精品狠狠爱av | 人妻夜夜爽天天爽三区丁香花 | 国产精品亚洲一区二区在线观看 | 久久精品国产大片免费观看 | 口国产成人高清在线播放 | 久久中文字幕人妻熟av女 | 国产午夜三级一区二区三 | 国产成人艳妇aa视频在线 | 最近的中文字幕在线看视频 | 99久久久无码国产精品性 |